الملخص
- الخلفية
تُستخدم قشور الليمون (Citrus limon) منذ فترة طويلة ضمن أنظمة الطب الصيني التقليدي لخصائصها الطبية الواسعة. تُمثل الفلافونويدات والمركبات البوليفينولية المكونات الحيوية الأهم في قشور الليمون، والتي تحمل وعداً كبيراً لتطويرها كعلاجات طبيعية آمنة خالية من الآثار الجانبية. صُممت هذه الدراسة للتحقيق بشكل منهجي في التأثير الوقائي لبوليفينول قشور الليمون (LPP) ضد الضرر الخلوي الناجم عن الإجهاد التأكسدي في خلايا الكيراتين البشري HaCaT، مع تحديد مكوناتها الكيميائية النباتية النشطة المحددة وآلياتها الجزيئية الكامنة.
- الطرق
تم تحديد المكونات الكيميائية النباتية النشطة لبوليفينول قشور الليمون (LPP) كمياً ونوعياً باستخدام اللوني السائل عالي الأداء (HPLC). تم تقييم القدرة المضادة للأكسدة المخبرية (in vitro) لـ LPP من خلال قياس قدرتها على كسح الجذور الحرة DPPH و $ABTS^+$ مقارنة بفيتامين ج (Vc). تم تحديد معدلات بقاء الخلايا وحيويتها باستخدام مقاييس MTT. تم قياس أنشطة أنزيمات مضادات الأكسدة داخل الخلايا، ومؤشرات الإجهاد التأكسدي، والمؤشرات البيوكيميائية — بما في ذلك إنزيم سوبروكسيد ديسميوتاز (SOD)، والكاتلاز (CAT)، والجلوتاثيون (GSH)، ونازع هيدروجين اللاكتات (LDH)، ومالونديالديهايد (MDA) — باستخدام مجموعات اختبار تجارية. علاوة على ذلك، تم تقييم مستويات تعبير الحمض النووي الريبي المرسال (mRNA) والبروتين للمقاييس التنظيمية الرئيسية، بما في ذلك بروتين Bax المرتبط بـ Bcl-2، وكاسبيز-3، والعامل النسخي المرتبط بالإريثرويد 2 (Nrf2)، وهيم أكسيجيناز-1 (HO-1)، باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) والوسترن بلوت.
- النتائج
كشفت التحليلات الكيميائية النباتية أن LPP يحتوي على ملف غني من المواد النشطة، وتحديداً حامض الغاليك، وحامض النيوشلوروجينيك، و(+)-كاتشين، وحامض الكافيك، و(-)-كاتشين غالات، وحامض الإيوشلوروجينيك أ، وحامض الروزمارينيك، وحامض البروتوكาทีك. في مقاييس مضادات الأكسدة، كانت قدرات كسح الجذور الحرة لـ LPP ضد جذور DPPH و $ABTS^+$ متفوقة على تلك الخاصة بفيتامين ج بتركيزات مكافئة. في ظل ظروف الإجهاد التأكسدي، أظهرت مجموعة النموذج انخفاضاً كبيراً في بقاء الخلايا، وارتفاع مستويات نازع هيدروجين اللاكتات (LDH) ومالونديالديهايد (MDA) داخل الخلايا، وانخفاض تراكيز سوبروكسيد ديسميوتاز (SOD)، والكاتلاز (CAT)، والجلوتاثيون (GSH) مقارنة بالمجموعة الضابطة العادية. أظهرت التحليلات الجزيئية أن علاج LPP عكس هذه التغيرات المرضية بفاعلية من خلال تحسين معدلات بقاء الخلايا، وتقليل تراكم LDH و MDA داخل الخلايا، وتعزيز مستويات SOD و CAT و GSH داخل الخلايا. علاوة على ذلك، نظم علاج LPP تعبيرات البروتينات الموتية والحماية الخلوية عن طريق تقليل تنظيم Bax، وكاسبيز-3، وNrf2، وHO-1، بينما قام بتنظيم تعبير Bcl-2 نحو الأعلى.
- الاستنتاجات
تُظهر بوليفينول قشور الليمون (LPP) فاعلية استثنائية مضادة للأكسدة مخبرياً وتقي خلايا الكيراتين البشري HaCaT ضد الضرر الناجم عن الإجهاد التأكسدي. يتوسط هذه التأثيرات الوقائية تنظيم مسار إشارة Nrf2/HO-1 الميسر بواسطة المواد الكيميائية النباتية الثماني المحددة، مما يدعم الاستخدام المحتمل لـ LPP كعامل علاجي طبيعي قيم في التطبيقات الجلدية.
https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7874231/